本发明公开了一种检测半胱氨酸的荧光探针及其制备方法与使用方法。本发明利用发射波长处于近红外区的苯并 BODIPY 为荧光团,并在易于修饰的 3-位引入苯亚砜部分。当存在半胱氨酸的条件下,苯亚砜部分被半胱氨酸取代离去,进而得到半胱氨酸取代的苯并BODIPY。本发明提供的氟硼二吡咯甲川类染料的“比率计型”半胱氨酸探针及其专用检测试剂盒对半胱氨酸溶液具有良好的响应,能够实现对细胞内半胱氨酸的检测,具有操作简便,成本低廉,响应灵敏,易于推广和应用等优点。